قبل التجربة ، يجب موازنة جميع الكواشف والعينات بدرجة حرارة الغرفة ؛ بعد إعادة الصهر ، يجب طرد العينات مرة أخرى وأخذ مادة طافية للاختبار ؛ بالنسبة للكواشف أو لتحضير العينات ، قم بخلط وتجنب تكون الرغوة ؛ يوصى بالمعايرة والعينات للاختبار المكرر.

1. إضافة ple: أضف حل العمل القياسي إلى أول بئرين على التوالي ، وأضف فتحتين لكل تركيز من محلول العمل ، 100 ميكرومتر L من كل بئر. تضاف العينات المراد اختبارها إلى آبار أخرى ، 100 ميكرومتر لتر لكل بئر (لتركيز العينة فوق نطاق الاختبار ، يتم تخفيف العينة باستخدام التخفيفات المعيارية والعينة). كانت الصفيحة مغلفة بالفيلم وحضنت عند 37 ℃ لمدة 90 دقيقة. نصيحة: عند إضافة العينة إلى الجزء السفلي من الصفيحة الدقيقة ، حاول ألا تلمس جدار الفتحة ، وقم بالرج والخلط برفق لتجنب تكوين الفقاعات. يجب التحكم في الوقت الإضافي في غضون 10 دقائق.

2. الجسم المضاد / مولد الضد المعالج بالبيوتينيل: تخلص من السائل ، ورجه جافًا ، بدون غسل ، تمت إضافة 100 ميكرولتر من محلول عامل مضاد حيوي / مولد ضد على الفور إلى كل بئر ، وخلطه ، وصفيحة ميكروسكوبية مغلفة بالفيلم ، وحضنت عند 37 ℃ لمدة ساعة واحدة.

3. الغسيل: قم برج السائل الموجود في الحفرة ، وأضف 350 ميكرولتر من سائل الغسيل لكل بئر ، وانقع لمدة 1-2 دقيقة ، ثم قم بامتصاص أو التخلص من السائل الموجود في الصفيحة الدقيقة ، واتركها حتى تجف على الورق الماص السميك. كرر هذه الخطوة 3 مرات. نصيحة: يمكن استخدام الغسالة هنا وفي خطوات الغسيل الأخرى. كل خطوة من خطوات الغسيل ضرورية للتجربة.

4. إنزيم HRP المتقارن: 100 ميكرومتر L من محلول الإنزيم المتقارن لكل بئر ، مختلط ، مغلف بالفيلم ، ومحتضن عند 37 ℃ لمدة 30 دقيقة.

5. الغسيل: تخلص من السائل في البئر ، واغسل الطبق 5 مرات بنفس طريقة الخطوة 3.

6. الركيزة: أضف 90 ميكرولتر من محلول الركيزة (TMB) إلى كل بئر ، واخلط جيدًا ، وأضف طلاء الفيلم ، واحتضان عند 37 ℃ لمدة 15 دقيقة تقريبًا. ملاحظة: يجب تقصير وقت الحضانة أو تمديده وفقًا لحالة تطور اللون الفعلية ، ولكن ليس أكثر من 30 دقيقة. يمكن إنهاؤه عندما يظهر تدرج واضح في الفتحة القياسية.

7. الإنهاء: أضف 50 ميكرومتر L من محلول الإنهاء لكل بئر لإنهاء التفاعل. ملاحظة: يجب أن يكون ترتيب إضافة حل الإنهاء هو نفس ترتيب حل الركيزة.

8. القراءة: قم على الفور بقياس الكثافة البصرية (OD) لكل بئر عند 450 نانومتر باستخدام قارئ الصفيحة الدقيقة. يجب فتح قارئ الصفيحة الدقيقة مسبقًا لإعداد إجراء الاختبار.

9. بعد التجربة ، أعد الكاشف غير المستخدم إلى الثلاجة وفقًا لدرجة حرارة التخزين المحددة حتى انتهاء الصلاحية.