كمادة مساعدة في تجارب الكشف عن ELISA ، إنزيم طبق يلعب دورًا حاسمًا ويؤثر بشكل مباشر على النتائج التجريبية النهائية. جودة لوحة إنزيم يعتمد بشكل أساسي على حساسيته لامتصاص البروتين ، والاختلاف في قدرة امتصاص البروتين بين الألواح والثقوب ، والاختلاف بين دفعات الشراء المشتراة لوحة الانزيم . لذلك ، فإن اختيار ملف لوحة الانزيم منتج ذو حساسية عالية لامتصاص البروتين ، والفرق الصغير بين ثقوب سعة امتصاص البروتين ، والفرق الصغير بين الدُفعات هو ضمان للمُجرب للحصول على نتائج تجريبية موثوقة ومستقرة.

لوحة إنزيم التصنيف: وفقًا لمعايير التصنيف المختلفة ، اللوحة لديها تصنيفات مختلفة.

1: وفقًا لعدد الثقوب ، يمكن تقسيمها إلى 96 حفرة ، 48 ثقبًا ، إلخ لوحة الانزيم يستخدم بشكل رئيسي مع قارئ الصفيحة الدقيقة ، و طبق متر في السوق هو 96 حفرة على الأكثر ، وبالتالي فإن الصفيحة الدقيقة 96 حفرة.

2: وفقًا للقيعان المختلفة ، يتم تقسيمها إلى قاع مسطح ، قاع U ، قاع V ، إلخ.

معامل الانكسار للقاعدة المسطحة منخفض ، وهو مناسب للكشف في الصفيحة الدقيقة ؛

تي معامل انكسار الصفيحة الدقيقة على شكل U مرتفع ومناسب لأخذ العينات وأخذ العينات والخلط ، ويمكنه ملاحظة تغير اللون مباشرةً دون وضعه على الصفيحة الدقيقة ، وذلك لتحديد ما إذا كان هناك رد فعل مناعي مماثل.

يمكن للصفيحة الدقيقة للقاعدة V أن تمتص العينة بدقة.

3: وفقًا لقدرات الربط المختلفة للصفيحة الدقيقة والبروتين والجزيئات الأخرى ، يتم تقسيمها إلى قوة ربط عالية ، وقوة ربط متوسطة ، وأمين.

(1) قوة ربط عالية

بعد سطح الصفيحة الدقيقة هذه ، تم تحسين قدرتها على ربط البروتين بشكل كبير ، حتى 300 ~ 400 نانوغرام IgG / سم 2 ، والوزن الجزيئي للبروتين المرتبط الرئيسي> 10 كيلو دالتون. يمكن أن يؤدي استخدام هذه الفئة من الصفيحة الدقيقة إلى تحسين الحساسية ، ويمكن أن يقلل تركيز وكمية البروتين المطلي نسبيًا ، مما يسهل إنتاج تفاعلات غير محددة. بعد الطلاء بالمستضد أو الجسم المضاد ، لا يمكن للمنظف غير الأيوني إغلاق موقع البروتين غير المرتبط بشكل فعال ، ويجب استخدام البروتين كعامل مانع للتسرب.

(2) قوة ربط متوسطة

ترتبط هذه الصفائح الدقيقة بالبروتين بشكل سلبي من خلال روابط كارهة للماء على السطح ، وهي مناسبة كحاملات المرحلة الصلبة للبروتينات الجزيئية ذات الوزن الجزيئي> 20 كيلو دالتون ، مع قدرة ربط البروتين من 200 إلى 300 نانوغرام IgG / سم 2. نظرًا لخصائص ارتباطها الوحيد بالجزيئات الكبيرة ، فهي مناسبة لحاملات المرحلة الصلبة كأجسام مضادة أو مستضدات غير منقاة لتقليل احتمالية التفاعل التبادلي غير المحدد. يمكن أن تكون اللوحة عبارة عن بروتين خامل أو منظف غير أيوني كمحلول مانع للتسرب.

(3) أمينة

تحتوي هذه الصفيحة المجهرية بعد تعديل السطح على مجموعة أمينية موجبة الشحنة ، يتم استبدال الرابطة الكارهة للماء برابطة محبة للماء. هذه الفئة من الصفيحة الدقيقة مناسبة كحامل المرحلة الصلبة لبروتينات الجزيئات الصغيرة. باستخدام عازلة ودرجة حموضة مناسبة ، يرتبط السطح بجزيئات صغيرة سالبة الشحنة عبر الروابط الأيونية. نظرًا للخصائص المحبة للماء لسطحه وقدرته على الارتباط تساهميًا بواسطة روابط متقاطعة أخرى ، يمكن استخدامه لإصلاح جزيئات البروتين القابلة للذوبان في عوامل إزالة التلوث مثل Triton-100 و Tween 20 وما إلى ذلك. عيب هذه اللوحة هو بسبب انخفاض كره الماء ؛ علاوة على ذلك ، يجب إغلاق السطح بشكل فعال. نظرًا لخصائص السطح المحبة للماء والتساهمية ، يجب أن يكون محلول الختم المستخدم قادرًا على التفاعل مع أي مجموعة وظيفية في المجموعة الأمينية غير التفاعلية والرابط المتشابك المحدد.

4. حسب اللون يمكن تقسيمها إلى شفاف ، أسود ، وأبيض.

الشفافة هي الأكثر استخدامًا في تجارب التحصين المرتبطة بالإنزيم الأكثر شيوعًا. في Relcontrast إلى الصفيحة الدقيقة الشفافة ، توجد أيضًا صفائح دقيقة غير شفافة للكشف عن الضوء ، بشكل عام بالأبيض والأسود. تتميز الصفيحة السوداء نفسها بامتصاص الضوء ، لذا فإن إشاراتها أقل بكثير من الصفيحة البيضاء ، لذا فهي تستخدم عمومًا لاكتشاف الضوء القوي ، مثل الكشف عن التألق. يتم استخدام الصفيحة البيضاء للكشف عن الضوء الضعيف ، وغالبًا ما تستخدم في التلألؤ الكيميائي العام. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن للصفيحة السوداء أيضًا إضعاف مشكلة التفاعلات غير المحددة. في الوقت نفسه ، من المهم ملاحظة أنه مع الصفيحة الدقيقة العامة لا يمكن أن يكون الكشف عن الضوء ، لأن الضوء المنبعث من تفاعل اللمعان الكيميائي متناحٍ ، إذا ، مع صفيحة ميكروية شفافة ، لن ينتشر الضوء فقط من الاتجاه العمودي ، ولكن أيضًا من الاتجاه الأفقي ، اجعل الضوء سهلًا من خلال الفجوة بين الثقب وجدار الفتحة ، مما أدى إلى تأثر ضوء قيمة امتصاص الضوء للفتحة بالضوء المنبعث من الفتحة المجاورة.

يجب أن تكون اللوحة الدقيقة الجيدة ذات أداء امتصاص جيد ، وقيمة فارغة منخفضة ، وشفافية عالية لقاع الحفرة ، وأداء مشابه بين الألواح وبين فتحات نفس اللوحة. نظرًا للاختلاف في المواد الخام والاختلاف في عملية الإنتاج ، فإن جودة المنتجات المختلفة مختلفة تمامًا ، لذلك ، يجب فحص أداء كل دفعة من الصفيحة الدقيقة مسبقًا قبل الاستخدام. طرق الفحص شائعة الاستخدام هي تركيز معين من IgG البشري (بشكل عام 10 نانوغرام / مل) مغطى بآبار لوحة ELISA ، بعد الغسيل ، إضافة تخفيف مناسب من الأجسام المضادة IgG المضادة للإنسان التي تحمل علامات الإنزيم لكل بئر ، والغسيل بعد الحفاظ على الحرارة ، إضافة لون الركيزة ، وإيقاف تفاعل الإنزيم ، وقياس امتصاص المحلول في كل بئر على التوالي. تم التحكم في ظروف التفاعل بحيث يتم الاحتفاظ بقراءة كل بئر عند امتصاص حوالي 0.8. تم حساب متوسط ​​إجمالي القراءات. أن يكون الفرق بين متوسط ​​كل القراءات الفردية وجميع القراءات أقل من 10٪. الألواح الدقيقة الثلاثة التالية هي A و B و C كمثال.

الطريقة المباشرة: للكشف عن امتزاز الإنسان IgG على سطح الصفيحة الدقيقة

طريقة شطيرة الجسم المضاد المزدوج: مستضد في مصل الدم موجب لجسم مضاد للإنسان

كما يتضح من الشكل أعلاه ، في هذه الأنواع الثلاثة من لوحات الإنزيم الحيوي ، تتمتع الصفيحة الدقيقة من الفئة أ بتأثير أفضل على امتصاص البروتين ، ولكنها تعمل أيضًا على تحسين حساسية امتصاص البروتين ، والتي يمكن أن توفر بيانات تجريبية أكثر موثوقية. بالإضافة إلى ذلك ، يمكنك أن تسأل عن لوحة فرق الدُفعة. فيما يلي اختلاف الدُفعات في لوحة معينة. كما يتضح من مخطط بيانات الفرق داخل الدُفعة ، تتمتع الصفيحة الدقيقة باستقرار جيد بين الدُفعات ، ويبلغ معامل الاختلاف داخل الدُفعة حوالي 5.0٪ ، وهو أقل بكثير من معامل التباين داخل الدُفعة أقل من 10.0٪ في معيار مراقبة الجودة للتفاعل المناعي السريري. لذلك ، فهي مناسبة أيضًا لتجارب ELISA