ص إيكوفري

1. قم بإزالة الأنبوب المجمد من النيتروجين السائل ودخله على الفور في حمام مائي 37 درجة ، مع رجّه قليلاً. بعد أن يذوب السائل (حوالي 1-1.5 دقيقة) ، أخرج بعض الكحول وضعه على طاولة العمل فائقة النظافة.

2. خذ تعليق الخلية في أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل وسط 10 مل (اغسل الأنبوب المجمد بالوسيط واغسل جميع الخلايا الملتصقة بالجدار) وجهاز الطرد المركزي عند 1000 لمدة 5 دقائق.

3. تم عكس المادة الطافية وإضافة 1 مل من الوسط لتعليق الخلايا. يدخن في طبق بحجم 10 سم مع 10 مل من الوسط ويهز برفق يمينًا ويسارًا لتوزيع الخلايا في الطبق بالتساوي.

4. قم بتمييز نوع الخلية والتاريخ ، والاسم البشري ، وما إلى ذلك ، ضعها في حاضنة ثاني أكسيد الكربون ، وقم بلصق الخلايا وتغيير الوسط.

5. تم تغيير الوسيط مرة كل 3 أيام.

ص assage

1. تم تمرير النباتات لتصل إلى تغطية 80-90٪.

2. أبوب الوسيط الأصلي .

3. أضف التربسين المناسب (فقط قم بتغطية الخلايا) وهضم لمدة 1-2 دقيقة .

4. تم إنهاء الهضم بإضافة حجم متساوٍ من الوسط المحتوي على المصل .

5. انفخ الخلايا بمسدس ماصة واتركها معلقة.

6. تم استنشاق الخلايا في أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل وطردها عند 1000 لمدة 5 دقائق.

7. صب المادة طافية وإضافة 1-2 مل من الوسط لتفجير جميع الخلايا.

8. تم تمرير الخلايا إلى العديد من أطباق الاستنبات اعتمادًا على أنواع الخلايا. بشكل عام ، تنقسم الخلايا السرطانية إلى 5 خلايا وتنتقل ثلاث خلايا طبيعية. استمر في الزراعة.

حر في هضم الخلايا وطردها (المرجع السابق أعلاه).

قم بتعليق الخلايا بمحلول التخزين المجمد المتطابق ، وقم بتقسيمها إلى أنبوب تجميد معقم ، واسترح لبضع دقائق ، وحدد نوع الخلية وتاريخ التخزين المجمد. ثم يتم تخزينها في نضح النيتروجين السائل.

تحضير محلول الحفظ بالتبريد: 70٪ متوسط ​​20٪ FBS 10٪ DMSO. يجب إضافة DMSO ببطء ورجها بثبات